Kuinka paljon ligaation muuttaminen maksaa?

2024 Kirjoittaja: Miles Stephen | [email protected]. Viimeksi muokattu: 2023-12-15 23:35

Muutos . Lisää 1-5 µl ligaatio sekoitus päteviin soluihin muunnos . Laajennettu ligaatio PEG aiheuttaa laskun muunnos tehokkuus (nopea Ligaatio Pakki). Elektroporaatiota suositellaan suurille rakenteille (>10 000 bp).

Kuinka paljon ligaatiotuotetta tarvitsen transformaatioon?

Muutos . Lisää 1-5 µl ligaatio sekoitus päteviin soluihin muunnos . Laajennettu ligaatio PEG aiheuttaa laskun muunnos tehokkuus (nopea Ligaatio Pakki). Elektroporaatiota suositellaan suurille rakenteille (>10 000 bp).

Myöhemmin kysymys kuuluu, mitä on ligaatio ja transformaatio? Tyypillisessä kloonauskokeessa tutkijat lisäävät ensin DNA-palan, kuten geenin, pyöreään DNA-kappaleeseen, jota kutsutaan plasmidiksi. Tämä vaihe käyttää restriktioentsyymejä ja DNA-ligaasia, ja sitä kutsutaan a ligaatio . Jälkeen ligaatio , seuraava vaihe on siirtää DNA bakteereihin prosessissa, jota kutsutaan muunnos.

Tämän jälkeen voidaan myös kysyä, kuinka paljon DNA:ta tarvitaan ligaatioon?

Vektorin + insertin kokonaiskonsentraation tulisi olla välillä 1-10 Μg/ml tehokkaan vaikutuksen varmistamiseksi ligaatio . Vektori: Suositeltava moolisuhde on välillä 1:1–1:10 (1:3 on tyypillinen). Jos olet epävarma omasta DNA pitoisuuksia, suorita useita ligaatioita vaihtelevilla suhteilla.

Kuinka kauan voit säilyttää ligaatioreaktion?

Ligaatiot voivat tehdä huoneenlämmössä tai viileämmässä (12-16°C) yön yli tai jopa muutaman päivän ajan, jos sinä ovat todella kiireisiä. Sinä pystyt myös säilytä sidos jääkaapissa ja ota se myöhemmin ulos jatkaaksesi ligointia huoneenlämmössä pitkä tarvittaessa.