Mikä on PCR-tuotteen puhdistuksen tarkoitus?

2024 Kirjoittaja: Miles Stephen | [email protected]. Viimeksi muokattu: 2023-12-15 23:35

Puhdistus DNA:ta a PCR Reaktio on tyypillisesti välttämätön myöhempää käyttöä varten, ja se helpottaa entsyymien, nukleotidien, alukkeiden ja puskurikomponenttien poistamista. Perinteisesti tämä suoritettiin käyttämällä orgaanisia uuttomenetelmiä, kuten fenoli-kloroformiuuttoa, jota seurasi etanolisaostus.

Kysymys kuuluu myös, miksi PCR-tuotteiden puhdistaminen on välttämätöntä?

Sinun täytyy puhdistaa PCR-tuotteet päästä eroon käyttämättömistä alukkeista, nukleotideista ja entsyymeistä optimoidakseen ligaation onnistumisen, joka ylläpitää ja sekvensoi tuote / PCR . Vastaanottaja puhdistaa the PCR tuotteet , kokoekskluusiokromatografiaa käytetään.

Lisäksi mitä minun pitäisi tehdä PCR:n jälkeen? Maksimoi talteenotto huuhtelemalla retentaattikuppi kahdesti 10–20 µl:lla TE:tä tai vedellä. Viimeinen PCR Reaktio voi sisältää jopa mikrogramman monistettua DNA:ta, jota voidaan käyttää erilaisiin molekyylibiologian sovelluksiin. Nämä sovellukset voivat olla enemmän tai vähemmän herkkiä jäännöskomponenteille PCR reaktioseosta.

Voidaan myös kysyä, kuinka puhdistat PCR-tuotteet?

Klassisia menetelmiä käytetään puhdas ylös PCR tuotteet Ennen sekvensointia ovat geelielektroforeesi, etanolisaostus ja pylväskromatografia. Vaikka nämä menetelmät ovat melko tehokkaita, ne voivat nopeasti tulla hankalia, kun käsitellään useita näytteitä rinnakkain, ja niissä esiintyy vaihtelevaa näytehäviötä.

Miksi DNA pitää puhdistaa?

Me puhdas ylös DNA vesiliuoksista puskurisuolien, entsyymien tai muiden aineiden poistamiseksi, jotka voivat vaikuttaa myöhempien sovellusten käyttöön. Esimerkkejä ovat PCR-reaktio puhdas ylös, puhdas ylös restriktiosulatuksen jälkeen ja puhdas genomista tai plasmidista DNA soluproteiinien/jätteiden saastuttama.