Miten DNA-pitoisuus lasketaan spektrofotometrillä?
Miten DNA-pitoisuus lasketaan spektrofotometrillä?

Video: Miten DNA-pitoisuus lasketaan spektrofotometrillä?

Video: Miten DNA-pitoisuus lasketaan spektrofotometrillä?
Video: Massa- ja tilavuusprosentti 2024, Maaliskuu
Anonim

DNA-pitoisuus On arvioinut mittaamalla absorbanssi aallonpituudella 260 nm, säätämällä A260 sameuden mittaus ( mitattuna absorbanssi 320 nm:ssä), kertomalla kirjoittaja laimennuskerroin ja käyttämällä suhde, jonka A260 1,0 = 50 ug/ml puhdasta dsDNA:ta.

Ihmiset kysyvät myös, kuinka löydät DNA:n pitoisuuden ja puhtauden?

Arvioida DNA:n puhtaus , mittaa absorbanssi 230 nm - 320 nm havaitaksesi muut mahdolliset epäpuhtaudet. Yleisin puhtauslaskenta on absorbanssin suhde aallonpituudella 260 nm jaettuna lukemalla aallonpituudella 280 nm. Hyvä laatu DNA tulee olemaan A260/A280 suhde 1,7-2,0.

Samoin, mikä on hyvä DNA-pitoisuus? A hyvä laatu DNA näytteessä tulee olla A260/A280 suhde 1,7-2,0 ja A260/A230 suhde on suurempi kuin 1,5, mutta koska eri tekniikoiden herkkyys näille epäpuhtauksille vaihtelee, näitä arvoja tulee käyttää vain ohjeina näytteesi puhtaudesta.

Miten NanoDrop laskee DNA-pitoisuuden tähän liittyen?

Kerrotaan absorbanssin arvo aallonpituudella 260 nm kiinteällä kertoimella (se on 50 DNA ) ja saat sen DNA-pitoisuus . Voilá. (Ok, se on teknisesti 10 mm paksun näytteen A260, joka kerrotaan 50:llä; NanoDrop ilmaisee A260:n ikään kuin näyte olisi 10 mm paksu, kuten tavallisessa kyvetissä).

Miksi meidän piti käyttää spektrofotometriä DNA:n kvantifiointiin?

A spektrofotometri on pystyy määrittämään nukleiinihappojen keskimääräiset pitoisuudet DNA tai RNA:ta seoksessa, sekä niiden puhtaus. Käyttämällä Beer-Lambertin laki se On on mahdollista suhteuttaa absorboituneen valon määrä absorboivan molekyylin pitoisuuteen.

Suositeltava: